在多肽固相合成中，氨基酸缺失是最常見最嚴(yán)重的問題之一。缺失肽與目標(biāo)多肽的不同在于少了一個或幾個氨基酸，一般情況下，這些缺失肽的極性與目標(biāo)多肽的極性是非常接近的，從而增加了純化的難度。

上圖展示了使用SPPS合成的>40mer的多肽，即使經(jīng)過細(xì)致的二維HPLC純化后，把絕大多數(shù)的雜質(zhì)給分走了，但仍然有缺失肽未能完全分開。這說明了缺失肽嚴(yán)重的影響固相多肽的合成純度。下面給大家介紹缺失肽的成因以及如何避免其形成。

1.氨基酸偶連不完全

在固相合成中，氨基酸偶連不完全是缺失肽形成的重要原因之一。在氨基酸偶連后，進(jìn)行封端能夠避免極性相近的缺失肽的形成。一般情況下，封端肽要比缺失肽更容易分離與辨認(rèn)。

避免缺失肽形成的策略：每步偶連氨基酸后進(jìn)行封端處理或者至少在難偶連的氨基酸后進(jìn)行封端。

2.Fmoc保護(hù)基脫除不完全

脫除Fmoc保護(hù)基不完全導(dǎo)致的氨基酸缺失：

對Fmoc難脫除的反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)控：

避免缺失肽形成的策略：辨明難脫除的Fmoc保護(hù)基位點(diǎn)并優(yōu)化其脫保護(hù)條件。

3.二酮哌嗪的形成

二酮哌嗪的形成導(dǎo)致雙氨基酸的缺失：

避免缺失肽形成的策略：

（1）避免容易形成二酮哌嗪的N端的序列；

（2）當(dāng)N端容易發(fā)生環(huán)化形成二酮哌嗪時(shí)，避免使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿等；

（3）使用大位阻的樹脂。

4.未對反應(yīng)不完全的樹脂進(jìn)行封端

未對樹脂上未反應(yīng)的反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行封端會導(dǎo)致C端缺失肽的形成。

避免缺失肽形成的策略：確保樹脂完全反應(yīng)。

5.原料含有雜質(zhì)

   比如說，在自己準(zhǔn)備的二肽原料中含有雜質(zhì)，這樣也會導(dǎo)致缺失肽的產(chǎn)生：

避免缺失肽形成的策略：嚴(yán)格控制用于固相合成的原料純度。

6.反應(yīng)體系中出現(xiàn)醛或酮

Kent發(fā)現(xiàn)含有醛基的樹脂會引起缺失肽的產(chǎn)生。醛基或酮羰基會通過如下圖反應(yīng)的機(jī)理來使N端無法正常偶連，從而產(chǎn)生缺失肽。

除了樹脂上的醛或酮羰基以外，溶劑或原料中的醛或酮也會對裸露的N端進(jìn)行暫時(shí)性的封端，從而導(dǎo)致缺失肽的產(chǎn)生。

避免缺失肽形成的策略：確保用于固相合成的樹脂、溶劑、試劑和反應(yīng)物中沒有醛或酮類雜質(zhì)。

總結(jié)：

1.產(chǎn)生缺失肽的原因有很多；

2.在固相合成中，抑制缺失肽的形成是非常重要的，這樣能降低分離純化的難度；

3.避免缺失肽產(chǎn)生的策略有很多，具體采取何種策略必須根據(jù)實(shí)際情況而定；

4.必須嚴(yán)格控制固相合成中的原料純度、反應(yīng)條件等因素，這樣才能減少缺失肽的產(chǎn)生。