下面多肽定制給大家介紹下多肽合成常見(jiàn)問(wèn)題

什么是凈肽含量？

理解凈肽含量和全肽含量的不同很重要，凈肽含量是相對(duì)于非肽類物質(zhì)、大部分的平衡離子以及水分而言的肽的百分比。凈肽含量可以通過(guò)氨基酸分析進(jìn)行測(cè)定，如果您需要這方面的服務(wù)請(qǐng)向我們提供應(yīng)用請(qǐng)求。通常親水性多肽即便在嚴(yán)格的凍干條件下仍能吸收小分子水分。凈肽含量會(huì)隨著一次次的純化和凍干步驟發(fā)生變化。

多肽如何合成？

與天然蛋白的合成不同，多肽的合成是從C 端到N 端。我們所采用的多肽合成技術(shù)主要根據(jù)Fmoc 和t-Boc化學(xué)法保護(hù)α-氨基以實(shí)現(xiàn)多肽合成。脫保護(hù)試劑（哌啶脫除Fmoc；TFA脫出Boc）解除α-氨基的保護(hù)基團(tuán)以保證序列中下一個(gè)氨基酸的耦合。，這個(gè)暴露的氨基會(huì)與接下來(lái)活化的氨基酸形成肽鍵。當(dāng)合成完成時(shí)，多肽會(huì)從樹脂上切下來(lái)并脫去保護(hù)。此時(shí)多肽可以沉淀、清洗并最終冷凍干燥得到所要的產(chǎn)品。

固相多肽合成切割方法

固相多肽合成完成之后，必須選擇合適的切割試劑將多肽從樹脂上切割下來(lái)，然后經(jīng)過(guò)冰乙醚沉淀，離心收集沉淀，經(jīng)過(guò)HPLC分離純化，冷凍干燥得到最后產(chǎn)品。由于選擇的樹脂不同，氨基酸序列不同，在切割時(shí)候，選擇的切割方法也不完全相同，一般都是選擇酸性條件下切割的條件，對(duì)于Wang，Rink-Amide，2-Cl脂，一般采用TFA切割，切割過(guò)程中加入，乙二硫醇，苯甲硫醚，水，三異丙基硅烷，苯酚等。這些添加試劑主要作為碳正離子俘獲試劑使用，目的是俘獲切割反應(yīng)過(guò)程中生成的碳正離子，減少這些碳正離子對(duì)部分氨基酸側(cè)鏈的進(jìn)攻導(dǎo)致的副反應(yīng)。切割試劑用量一般10-15ml/g樹脂。常用的切割配比： TFA/TIS/EDT/H2O（94/1/2.5/2.5），反應(yīng)一般是在室溫條件下2h-4h。

多肽合成中樹脂的用量

拿到客戶的訂單，我們會(huì)根據(jù)客戶的需求（重量、純度、鹽成分）結(jié)合序列的難易度，預(yù)估一個(gè)生產(chǎn)總收率。通過(guò)收率可以計(jì)算出合成規(guī)模，用合成規(guī)模除以樹脂的取代度，就可以得到需要樹脂的量了。

關(guān)于多肽吸潮的問(wèn)題

多肽在溶解和儲(chǔ)存時(shí)，應(yīng)遵循下列要點(diǎn)： 多肽長(zhǎng)期保存應(yīng)放置在-15℃以下。多肽容易吸潮，應(yīng)先把裝有多肽的瓶放在玻璃器中，至于室溫下平衡溫度，然后才能打開(kāi)瓶稱量多肽，多肽吸收水分后將影響穩(wěn)定性使多肽含量減少。從瓶中稱出所需量的多肽后，應(yīng)立刻將瓶蓋擰緊。

多肽應(yīng)溶解在適當(dāng)?shù)娜芤褐校核嵝远嚯膽?yīng)溶解在堿性溶液中，堿性多肽應(yīng)溶解在酸性溶液中。必要時(shí)可用超聲波幫助溶解。多肽含有Trp,Met,Cys應(yīng)該特別注意免氧化.應(yīng)該用無(wú)氧的水或還原劑.*儲(chǔ)存時(shí),多肽溶液應(yīng)該分裝后置于-15℃以下,多數(shù)含有Trp,Met,Cys的多肽半衰期較短,不應(yīng)長(zhǎng)期保存。

特殊多肽合成中存在的問(wèn)題

由于每一種多肽有它特殊的特征并且不是所有的結(jié)果都被預(yù)期到。如果我們?cè)诤铣芍谐霈F(xiàn)一些問(wèn)題同時(shí)不能及時(shí)發(fā)貨，我們會(huì)及時(shí)與您進(jìn)行溝通。

以上就是多肽廠家給大家介紹的相關(guān)內(nèi)容，希望對(duì)大家有所幫助。