FITC熒光標(biāo)記多肽屬于FRET肽(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)其中一種。FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具，其反應(yīng)過程容易連續(xù)監(jiān)測，為酶活性的檢測提供了一個(gè)便捷的方法。FRET肽生物學(xué)應(yīng)用于:

1. 新的蛋白水解酶的篩選和檢測。

2. 肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動(dòng)力特征和功能特征。

3. 多肽折疊的構(gòu)象研究。

FITC熒光標(biāo)記應(yīng)用廣泛，為黃色結(jié)晶，zui大吸收光波長為490～495nm,zui大發(fā)射光波長520～530nm，可呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC分子中含有異硫氰基與羧基熒光素相比更具活性，在堿性(pH9.0～9.5)條件下能與肽類或者蛋白的自由氨基結(jié)合，形成FITC-多肽/蛋白結(jié)合物，從而制成熒光多肽/蛋白。

在固相多肽合成過程中，F(xiàn)ITC可以與含有側(cè)鏈氨基的賴氨酸（Lys）、鳥氨酸（ornithine），或合成過程中的多肽N端氨基反應(yīng)。當(dāng)在N端標(biāo)記時(shí)，建議在zui后一個(gè)氨基和FITC與氨基反應(yīng)產(chǎn)生的硫脲鍵之間引入烷基間隔器（alkyl spacer），如氨基己酸（Ahx/Acp）。多肽兩種固相多肽合成方法(Fmoc和Boc策略合成法)zui終脫離樹脂程序，都要用到強(qiáng)酸TFA乃至更強(qiáng)的HF酸。如不引入氨基己酸（Ahx/Acp），氨基硫甲酰結(jié)構(gòu)在強(qiáng)酸TFA中，極易進(jìn)攻N末端*氨基酸的酰胺鍵，形成五元雜環(huán)(乙內(nèi)酰硫脲衍生物)，從多肽或者蛋白上脫落。在TFA/H2O體系中乙內(nèi)酰硫脲衍生物進(jìn)一步形成結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的乙內(nèi)酰硫氨基酸。從而連同zui后一個(gè)氨基酸從多肽或者蛋白上脫落。

引入氨基己酸(Ahx/Acp)，可以有效的保護(hù)FITC熒光標(biāo)記多肽的穩(wěn)定性，保證后續(xù)試驗(yàn)的穩(wěn)定。