多肽的溶解性

    溶解性是使用多肽時(shí)比較重要的條件。每個(gè)氨基酸都有其固有物理特性。如亮氨酸、異亮氨酸、頡氨酸是疏水性的，其他氨基酸如賴氨酸、組氨酸、精氨酸是親水性的。因此不同的多肽因其組成不同而具有不同的溶解性。

        我公司合成的所有多肽均是以凍干的形式提供給您，請(qǐng)您在使用之前仔細(xì)閱讀以下說(shuō)明書，以確保多肽在溶解和保存過(guò)程中不影響您的使用：

　　1. 如何正確溶解多肽?

　　溶解性是使用多肽時(shí)比較重要的問(wèn)題。每個(gè)氨基酸都有其固有化學(xué)特性。如亮氨酸Leu、異亮氨酸Ile、頡氨酸Val是疏水性的，其他氨基酸如賴氨酸Lys、組氨酸His、精氨酸Arg是親水性的。因此不同的多肽因其組成不同而具有不同的溶解性。

　　備注:在多肽溶解之前，建議您先用少量肽來(lái)試驗(yàn)最適溶解方法，只有當(dāng)多肽完全溶解后，才能加入水或緩沖液將之稀釋至最終濃度

　　2. 如何溶解易溶性多肽?

　　一般情況下，多肽首先選擇溶解在滅菌的蒸餾水或去離子水中。

　　如果這個(gè)肽是不溶于水的，且其是酸性的，加入溫和的堿如0.1%的NH4OH能夠增加肽的溶解度。相反，對(duì)于堿性的肽，溫和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能夠幫助多肽溶解。

　　3. 如何溶解疏水性多肽?

　　在一些情況下，某些肽具有很高的疏水性時(shí)，不易溶解，可以用少量的DMF或DMSO幫助其溶解，這時(shí)推薦將多肽溶解于高濃度，然后用水或緩沖液將其稀釋到正常的工作濃度。因?yàn)辂}會(huì)導(dǎo)致疏水性多肽的聚合，所以必須在多肽完全溶解后加入緩沖液進(jìn)一步稀釋。當(dāng)您遇到這種情況時(shí)，請(qǐng)您注意以下幾點(diǎn)說(shuō)明：

　　a. DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解，這是通過(guò)破壞多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)而助溶。

　　b. 這種試劑的使用可能會(huì)對(duì)其生物活性及后續(xù)的研究工作造成干擾，請(qǐng)您在溶解考慮到這個(gè)問(wèn)題。

 如果多肽溶解不好該怎么辦？

    對(duì)于使用多肽的研究人員來(lái)說(shuō)，多肽的溶解經(jīng)常是一個(gè)主要的難題。每個(gè)氨基酸都有不同的物理特性，所以不同的多肽有著不同的溶解性。通常方法，多肽首次須溶解于蒸餾水，更適合消毒水。如果溶解還是有問(wèn)題，請(qǐng)嘗試如下步驟：聲波降解有助于溶解多肽。少量醋酸稀釋溶液（10%濃度）有助于一般多肽的溶解，氨水溶液有助于酸性多肽的溶解。我們還推薦將多肽溶解于高濃度，然后用水或緩沖液將其稀釋到正常的工作濃度，因?yàn)辂}會(huì)導(dǎo)致聚合。（所以必須在多肽完全溶解后加入緩沖液。）

 是否需要在特殊PH值中溶解多肽？

    報(bào)告將會(huì)指示是否有特殊PH值的要求。 如果有特殊PH值要求，C.O.A報(bào)告中會(huì)注明。

有些溶解性上寫“ACN”，是什么意思？

    “ACN”是乙腈，是用來(lái)幫助溶解某些肽的。

凍干多肽的溶解

　　1. 多肽溶解中的主要問(wèn)題是二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成。

　　雖然疏水肽鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成更明顯，但除了最短的肽鏈外，該現(xiàn)象發(fā)生在幾乎所有肽鏈，與極性無(wú)關(guān)。因此，溶解多肽的第一個(gè)原則是用無(wú)菌的蒸餾水或去離子水(如果條件允許則用無(wú)氧水)。

　　多肽溶液可能遇到細(xì)菌降解。為避免該現(xiàn)象的發(fā)生, 多肽應(yīng)溶解在無(wú)菌的蒸餾水中, 或者用0.45或0.2μm孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。

　　包含Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化, 因此應(yīng)該溶于無(wú)氧的水中。無(wú)氧水可以通過(guò)注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到。

　　2. 若多肽不溶于純水，超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意: 超聲處理會(huì)引起溶液發(fā)熱和多肽降解。

　　3. 若多肽中包含多個(gè)堿性氨基酸，使用（1-10%）的乙酸水溶液；對(duì)于疏水性非常強(qiáng)的多肽，則使用50%乙酸。

　　4. 若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用氨溶液（1-10%）或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調(diào)整。

　　5. 異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱，有機(jī)溶劑的量則必須很少，否則將嚴(yán)重影響停留時(shí)間。

　　6. 若多肽因?yàn)楹蠽al、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側(cè)鏈而高度疏水，或?yàn)橹行噪臅r(shí), DMF或DMSO等膜變性劑的使用，有助于多肽的溶解。

　　a. 高濃度膜變性劑通過(guò)破壞多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)而助溶。

　　b. 膜變性劑適于多肽分析液的制備, 但可能會(huì)對(duì)其生物活性的研究工作造成干擾。

　　c. DMF是最佳變性劑(最高濃度可達(dá)30%), 滴加至多肽溶解。

　　d. 反相層析時(shí), DMF將與洗脫液前峰一起流出, 依注入量的多少, 峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF 流出后幾分鐘內(nèi)流出, 若肽鏈很小, 洗脫太早, 多肽的量將降低。

 對(duì)于一些難溶解于雙蒸水或緩沖液的肽常用稀乙酸（30%-50%）或稀氨水（30%左右）分別對(duì)于堿性（含Arg , Lys , His）或酸性（含Asp, Glu）多肽的溶解。這些方法不溶的多肽， 需要用少量DMF、DMSO溶解，然后加入適量緩沖液，這些溶劑可能對(duì)某些實(shí)驗(yàn)有副作用，所以在實(shí)驗(yàn)時(shí)要加注意。

注：肽鏈中含有殘基Ala,Cys,Ile,Leu,Met,Phe,Gln,Asn和Val將會(huì)增加多肽的溶解難度。