多肽廠家給您介紹原料藥制備工藝研究

合成多肽藥物的藥學(xué)研究內(nèi)容和一般化學(xué)藥物一樣，主要包括原料藥的制備工藝研究和結(jié)構(gòu)確證研究、制劑的處方工藝研究、質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂、穩(wěn)定性研究等。這些研究內(nèi)容的一般性的技術(shù)要求也和一般化學(xué)藥物基本一致。但是，正如前面所討論的，多肽藥物還有一些特殊的方面需要在研究中予以考慮，以下主要是針對多肽藥物藥學(xué)研究的特殊內(nèi)容及其技術(shù)要求進(jìn)行討論，這些技術(shù)要求也包括了對申報(bào)資料內(nèi)容的一些要求。

（一）原料藥制備工藝研究

1、工藝選擇

研究者可以根據(jù)目標(biāo)肽的結(jié)構(gòu)、自身生產(chǎn)條件等考慮選用液相合成或固相合成工藝。但無論采用何種合成工藝，均需要提供化學(xué)反應(yīng)式、工藝流程圖、操作過程等，對工藝參數(shù)（如投料量、反應(yīng)條件、反應(yīng)試劑）要有詳細(xì)的描述，包括對于多肽的修飾（例如二硫鍵的形成等）。

2、起始原料、試劑的質(zhì)量控制

（1） 氨基酸及其衍生物

氨基酸及其衍生物作為多肽合成的起始原料，其質(zhì)量對合成多肽的質(zhì)量有重要影響，因此應(yīng)關(guān)注氨基酸及其衍生物的來源、質(zhì)控方法等。對于起始原料的質(zhì)量控制應(yīng)足以保證其質(zhì)量的一致性，以最終保證合成的多肽批間質(zhì)量的穩(wěn)定。作為起始原料的氨基酸及其衍生物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一般應(yīng)包括性狀、熔點(diǎn)、比旋度、化學(xué)純度、色譜純度及光學(xué)純度、含量等，其中對于起始原料的化學(xué)純度和光學(xué)純度的控制尤為重要。

如果使用了特殊的氨基酸或其衍生物，例如經(jīng)過復(fù)雜修飾的非天然氨基酸、采用新工藝合成的氨基酸等，申報(bào)資料中還應(yīng)提供其合成工藝及結(jié)構(gòu)研究的相關(guān)資料。

（2） 樹脂

采用固相合成方法制備多肽，應(yīng)提供樹脂的來源、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)報(bào)告，并對樹脂的摩爾取代系數(shù)、在不同溶劑中的膨脹系數(shù)、所用合成條件下的穩(wěn)定性情況、交聯(lián)度等予以說明。

常用樹脂包括聚苯乙烯-苯二乙烯交聯(lián)樹脂、聚丙烯酰胺和聚乙烯-乙二醇類樹脂及衍生物等，應(yīng)根據(jù)目標(biāo)多肽C末端氨基酸的不同類型（如羧酸型、酰胺型等）選擇特定用途的樹脂，并說明選擇的依據(jù)。

（3）試劑和溶劑

可以參考《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的基本要求。

3、工藝的過程控制

（1）反應(yīng)終點(diǎn)監(jiān)控

液相合成屬于常規(guī)有機(jī)合成，一般可采用色譜法(如TLC法、HPLC法)監(jiān)測；固相合成偶合反應(yīng)的終點(diǎn)可采用茚三酮法、三硝基苯磺酸（TNBS）法和四氯苯醌等監(jiān)測。二硫鍵連接的終點(diǎn)可用Ellman試驗(yàn)或HPLC法監(jiān)測。除上述方法外，其他合適的方法也可以使用。

（2）中間體質(zhì)量控制

對于液相合成，應(yīng)參照《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》對中間體的質(zhì)量進(jìn)行控制，特別要對縮合片段制訂合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（例如對比旋度、熔點(diǎn)和純度等進(jìn)行控制），含有較長序列的中間體還應(yīng)進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究（例如氨基酸組成分析、氨基酸序列分析、質(zhì)譜、比旋度等）。

對于固相合成，一般無中間體分離過程。但如果多肽從樹脂上切割后還需進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，對中間體的質(zhì)量也要進(jìn)行相應(yīng)控制，同時(shí)還要進(jìn)行相應(yīng)的結(jié)構(gòu)研究。

4、分離和純化

在多肽合成過程中，會(huì)產(chǎn)生一些與目標(biāo)多肽結(jié)構(gòu)和性質(zhì)類似的雜肽，例如缺失肽、非對映異構(gòu)體等，隨著肽鏈的增長，可能存在的雜肽數(shù)量也隨之增加。因此，應(yīng)研究合適的純化方法將目標(biāo)肽從雜肽中分離出來。

多肽純化方法的選擇需要綜合考慮多肽和雜肽的肽鏈長短、極性和荷電性、粗品的純度等?？捎糜诙嚯募兓姆椒òㄖ亟Y(jié)晶、逆流分布、電泳、離子交換色譜、凝膠過濾色譜、反相色譜等。目前已上市多肽藥物常見的純化方法是采用凝膠柱脫鹽后，再用制備型高效液相色譜進(jìn)行純化。

對于選定的純化方法，應(yīng)提供詳細(xì)的驗(yàn)證性資料例如純化前后樣品的代表性色譜圖以說明純化效果。同時(shí)應(yīng)提供詳細(xì)的純化過程和相關(guān)的工藝參數(shù)。純化工藝的研究可結(jié)合質(zhì)量研究中雜質(zhì)分析方法的驗(yàn)證進(jìn)行。

純化后樣品的干燥方法也應(yīng)明確。常用的干燥方法為凍干法，如果多肽對溫度不敏感，也可采用室溫或高溫干燥。